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Critères d’identification d’un Staphylococcus Digestion papaïnique de viande de boeuf 500 mL Hydrolysat de gélatine 20 mL Citrate trisodique 3 g Eau distillée.

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1 Critères d’identification d’un Staphylococcus Digestion papaïnique de viande de boeuf 500 mL Hydrolysat de gélatine 20 mL Citrate trisodique 3 g Eau distillée 480 mL Composition Source de C et N Source minérale Bouillon special pour la recherche de la staphylocoagulase Infusion de cervelle deveau 200 g Infusion de cœur de bœuf 250 g Peptone de gélatine 10 g NaCl 5 g Phosphate disodique 2,5 g Glucose 2 g Eau distilléeqsp 1 L Bouillon CŒUR CERVELLE Source de C et N Source minérale Recherche de l’enzyme après 24 heures d’incubation dans ces bouillons à 37°C.

2 Recheche de la staphylocoagulase Prise en masse du mélange  présence de la Sptaphylocoagulase 0,25 mL de bouillon cœur cervelle : 5 gouttes Tube stérile Bouillon cœur cervelle Plasma oxalaté 0,25 mL de plasma oxalaté Incuber à 37°C pendant 30 min à 1 h Incliner délicatement le tube Le milieu reste liquide  absence de la Sptaphylocoagulase

3 Recherche de la thermonuclease Bouillon cœur cervelle 0,5 mL de bouillon cœur cervelle : 10 gouttes Tube stérile Porter au bain-marie à 100°C pendant 15 min ADN au bleu de touluidine Puits formé à l’aide d’une pointe de micropipette 1 goutte de milieu non chauffé 1 goutte de milieu chauffé Incuber 4 heures à 37°C

4 Mise en évidence des produits d’hydrolyse de l’ADN après passage à 100°C  présence de la thermonucléase Lecture Mise en évidence des produits d’hydrolyse de l’ADN sur bouillon normal  présence d’une activité DNase normale Mise en évidence des produits d’hydrolyse de l’ADN sur bouillon normal  présence d’une activité DNase normale Identification de Staphylococcus aureus entérotoxique Ce n’est pas un Staphylococcus aureus entérotoxique Absence de produits d’hydrolyse de l’ADN après passage à 100°C  absence de la thermonucléase Si test négatif pour les deux bouillons  il ne s’agit pas d’un Staphylococcus aureus Cas n°1 Cas n°2 Cas n°3

5 Pastorex Staph Le réactif Pastorex Staph + contient des particules de latex qui permettent la recherche simultanée sur les Staphylococcus: du facteur d’affinité pour le fibrinogène (RF), désigné sous le nom de coagulase liée, de la protéine A qui possède une affinité pour le fragment Fc des IgG des antigènes polysaccharidiques capsulaires des Staphylococcus résistants à la méticiline (antibiotique) Toute agglutination du réactif test en présence d’une souche de Staphylococcus permet d’identifier S SS Staphylococcus aureus. Émulsionner les colonies pendant 10 secondes. Prendre une pipette pour chaque test. Mode opératoire Lame ou plaque d’agglutination 1 goutte de témoin négatif 1 goutte de réactif test Lecture Absence d’agglutination  test négatif Présence d’une agglutination en moins de 40 s  test positif Identification de Staphylococcus aureus

6 IgG fibrinogène Ac anticapsulaire bille de latex Schéma explicatif + S aureus acapsulé Protéine A Facteur d’affinité pour le fibrinogène Reconnaissance de la protéine A et du facteur d’affinité pour le fibrinogène  Agglutination

7 + S aureus capsulé (METI R) Ag capsulaire Reconnaissance de l’Ag de capsule  Agglutination


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