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Le Diagnostique Les Bacilles Gram Positifs. Classification Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte.

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1 Le Diagnostique Les Bacilles Gram Positifs

2 Classification Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte ClostridiumNon-sporulantsAérobieListeria

3 Caractéristiques des Bacilles Sporulants Tous sont de gros bacilles Gram positifs Font des endospores Principalement retrouvés dans le sol, les eaux et la poussière Exigences nutrionelles très diverses –Utilisent des sources de carbones simples et complexes –Leurs spores leurs permettent de résister à des conditions extrêmes

4 Les Bacilles dImportance Médicale Bacillus –Majoritairement inofensifs –Quelques espèces opportunistes Bacillus cereus & Bacillus subtilis –Empoisonement alimentaire –Une espèce pathogène Bacillus anthracis –Anthrax

5 Les Bacilles dImportance Médicale Clostridium –Plusieurs espèces pathogènes Clostridium perfringens –Gangrène gazeuse Clostridium tetani –Tétanos Clostridium botulinum –Botulisme Clostridium difficile –Diarrhée

6 Identification: Tests Métaboliques Bouillon de phénol rouge –Métabolisme de sources de carbones simples –Source de carbone: Peptone (protéine acides aminés) Sucre désiré ajouté –Indicateur de pH Phénol rouge –Jaune pH acide –Orange pH neutre –Rouge pH alcalin

7 Bouillons de Phénols Rouges Utilisation de Carbone: –Sucre Réaction acide (Jaune) ou neutre (Original) –Protéine Réaction alcaline (Rouge)

8 Fermentation du Glucose Accumulation dacide: –Glucose pyruvate acide lactique et/ou acétique + CO 2 Accumulation de produits neutres –Glucose pyruvate acétoine 2 butanediol + CO 2

9 Test de Méthyl Rouge Test pour laccumulation dacide –Sources de carbones: Glucose et protéines –Indicateur -méthyl rouge; Ajouté après MR +: rouge (pH < 5.2) MR - : jaune (pH > 5.2)

10 Test de Voges-Proskauer VP + = rouge VP - = jaune Résultats habituelle de MR/VP: MR+/VP-; MR-/VP+ MR-/VP- Réactifs VP: butanediol + -naphthol + KOH + O 2 acétoine

11 Utilisation dUrée Carbone: –Urée Enzyme –Uréase Indicateur de pH –Phénol rouge C O + 2 H 2 O CO 2 + H 2 O + 2 NH 3 (NH 4 ) 2 CO 3 H2NH2N H2NH2N urée ammonium carbonate (alcalin) Acides aminés NégatifPositif

12 Utilisation du Carbone Complexe Trop gros pour le transport à lintérieur Nécessite enzymes exocellulaires pour la dégradation externe en petites unités –Polysaccharides Amidon (amylase) –Lipides (lipase) Tributyrine –Protéines (protéase) Caséine (caséinase)

13 Amylase Avant lajout diodeAprès lajout diode

14 Caséinase

15 Lipase

16 La Respiration Aérobie La Chaîne de Transport de- 3 H 2 O H+H+ 2 H + 3 H OH - 2 H + H2OH2O 3 H + + 1/2 O 2 2 e- Fp Fe-S 2 e- Q Cyt b Cyt o NADH + H + FADH 2 intérieur extérieur

17 Test dOxydase Cytochrome oxydase catalyse la réduction du capteur final de-, loxygène Un donneur artificiel de-, la phenylenediamine, est utilisé pour réduire le cytochrome oxydase Si lenzyme est présente, le réactif incolore (état réduit) deviendra bleu (état oxydé)

18 Catalase Ajout de 3% H 2 O 2 à la croissance bactérienne 2H 2 O 2 2H 2 O + O 2 catalase Produit de la respiration dommageable pour lADN Métabolisme daérobie requière la catalase Bulles (O 2 )

19 Respiration Anaérobie 2 H + 3 H OH - 3 H 2 O 2 H + NO H 2 O (N = +3) nitrite NO H + (N = +5) nitrate 2 e- Fp Fe-S 2 e- Q Cyt b NADH + H + FADH 2 Nitrate réductase Intérieur Extérieur Capteur final de-

20 Nitrate Réductase NO H e- H 2 O + NO 2 - NO, N 2 O, NH 2 OH, NH 3, N 2 nitrate nitrite Étape 1: Test pour nitrite NO acide sulfanilique et alpha naphthylamine HNO 2 Nitrate nest pas réduit Absence de Nitrite Jaune Nitrate est réduit Production de Nitrite Rouge Nitrate est réduit au nitrite Nitrite est réduit Absence de Nitrite Jaune

21 Nitrate Réductase (suite) NO H e- H 2 O + NO 2 - NO, N 2 O, NH 2 OH, NH 3, N 2 nitrate nitrite Étape 2: Test pour présence du nitrate NO Zn (s) NO 2 - Nitrate est présent Réduction au Nitrite Rouge Nitrate est absent Nitrite a été réduit Jaune

22 Le Diagnostique Les Cocci Gram Positifs

23 Classification Cocci Gram Positifs Streptococcaceae Catalase - Aérobie & anaérobie facultatif Streptococcus Micrococcaceae Catalase + AérobieMicrococcusStaphylococcus

24 Caractéristiques des Cocci Gram Positifs Tous sont non sporulants Principalement retrouvés parmi la flore naturelle des hommes et des animaux Exigences nutrionelles fastidieuses –Utilisent des sources de carbones simples

25 Aggrégation Cellulaire des Cocci Gram Positifs Micrococcus & Streptococcus Streptococcus Micrococcus Staphylococcus

26 Les Cocci Gram Positifs dImportance Médicale Micrococcaceae –Staphylococcus aureus Cause plusieurs types dinfections, maladies alimentaires et choc toxique –Staphylococcus epidermidis Cause des infections opportunistes –Staphylococcus saprophyticus Cause majeure de cystites chez les femmes

27 Les Cocci Gram Positifs dImportance Médicale Streptococcaceae –Streptococcus pyogenes –Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse de chair –Streptococcus agalactiae Infections génitales –Streptococcus mutans Endocardites –Streptococcus pneumonia Otite, meningite et pneumonie –Enterococcus spp. Infections opportunistes

28 Identification: Tests Métaboliques Microccocus Vs Staphylococcus Test doxydase –Micrococci sont + –Staphylococci sont – Bacitracine –Micrococci sont sensibles –Staphylococci sont résistants

29 Identification: Tests Métaboliques Différentitation des espèces de Staphylococcus Test de coagulase –Les staphylococci coagulase positifs »S. aureus –Staphylococci coagulase négatifs »Tous les autres Staphylococci Fermentation du mannitol –S. aureus et quelques S. saprophyticus sont positifs –S. epidermidis est negatif S. aureus S. epidermidis

30 Identification: Tests Métaboliques Différentiation des espèces de Streptoccocus Regroupement sérologique de Lancefield –Fondé sur le type dhydrate de carbone dans leur paroi »8 groupes (A-H et K-U) »Groupe A: β-hémolytique - Streptococcus pyogenes »Groupe B: β-hémolytique - S. agalactiae »Groupe C: α ou γ hémolytique- S. viridans »Groupe D: γ –hémolytique – Enterococcus »Pas classifié daprès le regroupement de Lancfield »α hémolytique- S. pneumoniae et S. mutans

31 Hémolyse Sanguine Gélose de sang: –Discrimination daprès patrons dhémolyses Hémolyse alpha - Hémolyse incomplète Hémolyse beta - Hémolyse complète Hémolyse gamma - Aucune hémolyse

32 Identification: Tests Métaboliques Identification de Streptoccocus pneumoniae –Solubilisation par la bile Strep. pneumoniae est positif Autres Strep. sont négatifs Identification dEnterococcus –Test de bile-esculin Enterococcus est positif Autres Strep. sont négatifs


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