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SÉRODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS. Agent infectieux : Treponema pallidum Bactérie hélicoïdale du groupe des Spirochètes Microscopie électronique à balayage.

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1 SÉRODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS

2 Agent infectieux : Treponema pallidum Bactérie hélicoïdale du groupe des Spirochètes Microscopie électronique à balayage Treponema pallidum dans un tissu

3 Syphilis : Infection Sexuellement Transmissible (IST). Les différentes appellations du nom en Europe montrent bien le cheminement de la progression de la première épidémie. –Mal de Naples ou mal napolitain (pour les Français) –Mal français (pour les Italiens) –Mal français (pour les Espagnols) –Mal espagnol (pour les Portugais) –Mal français (pour les Anglais) –Mal anglais (pour les Écossais) –Mal français (pour les Allemands) –Mal allemand (pour les Polonais) –Mal polonais (pour les Russes)

4 Evolution de la maladie Stade primaire :  chancre contenant Treponema pallidum Tests sérologiques négatifs.

5 Evolution de la maladie Stade secondaire : (2 à 6 mois après contact) Treponema pallidum passe dans le sang et contamine divers tissus.  Apparitions de lésions cutanées et muqueuses. Tests sérologiques positifs

6 Evolution de la maladie Stade tertiaire : 5 à 10 ans après le stade primaire.  caractérisé par diverses atteintes graves : osseuses, cardio-vasculaires, neurologiques Lésion osseuse

7 Maladie congénitale : transmission de la mère au foetus

8 Antigènes de Treponema pallidum et sérodiagnostic Enveloppe : Antigène polyosidique  spécifique de l’espèce Treponema pallidum  TPHA : recherche des anticorps sériques anti-polyoside Paroi : Antigène cardiolipidique  commum aux Treponèmes, bactéries et certains tissus animaux (ex : cœur de bœuf)  VDRL : recherche des anticorps sériques anti-cardiolipide

9 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory PRINCIPE : ANTIGENES MIS EN JEU :

10 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory PRINCIPE : On recherche dans le sérum la présence ou non d’anticorps dirigés contre le cardiolipide (anticorps anti-cardiolipide ou réagines de Wasserman).  Détection des anticorps par réaction d’AGGLUTINATION DIRECTE PASSIVE  Ce test est QUALITATIF ANTIGENES MIS EN JEU :

11 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory PRINCIPE : On recherche dans le sérum la présence ou non d’anticorps dirigés contre le cardiolipide (anticorps anti-cardiolipide ou réagines de Wasserman).  Détection des anticorps par réaction d’AGGLUTINATION DIRECTE PASSIVE  Ce test est QUALITATIF ANTIGENES MIS EN JEU : Les anticorps recherchés sont dirigés contre l’ANTIGÈNE CARDIOLIPIDIQUE :  constituant de la paroi commun à tous les tréponèmes, mais aussi à des bactéries, des végétaux et certains tissus animaux.

12 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :

13 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables.

14 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :

15 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :  agglutination, donc l’Ag VDRL utilisé est reconnu spécifiquement par des Ac anticardiolipides et les particules ont bien été sensibilisées.

16 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :  agglutination, donc l’Ag VDRL utilisé est reconnu spécifiquement par des Ac anticardiolipides et les particules ont bien été sensibilisées. C : TÉMOIN NÉGATIF :

17 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :  agglutination, donc l’Ag VDRL utilisé est reconnu spécifiquement par des Ac anticardiolipides et les particules ont bien été sensibilisées. C : TÉMOIN NÉGATIF :  pas d’agglutination, l’Ag VDRL n’est pas reconnu par des Ac autres que les Ac anticardiolipide. Le test est bien spécifique.

18 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory ESSAI : Les témoins sont corrects, le test est donc validé et on peut interpréter l’essai. CONCLUSION :

19 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory ESSAI : Les témoins sont corrects, le test est donc validé et on peut interpréter l’essai. AGGLUTINATION : donc il y a présence d’anticorps anti- cardiolipide dans le serum testé. CONCLUSION :

20 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory ESSAI : Les témoins sont corrects, le test est donc validé et on peut interpréter l’essai. AGGLUTINATION : donc il y a présence d’anticorps anti- cardiolipide dans le serum testé. Le patient a donc probablement été infecté par un Tréponème. Il faut confirmer ce résultat avec un Test quantitatif et SPÉCIFIQUE de Treponema pallidum, comme le test TPHA. CONCLUSION :

21 Test du TPHA Treponema pallidum hémagglutination assay PRINCIPE : On recherche dans le sérum la présence ou non d’anticorps dirigés contre le polyoside d’enveloppe  Détection des anticorps par réaction d’AGGLUTINATION DIRECTE PASSIVE  Ce test est QUANTITATIF ANTIGENES MIS EN JEU : Les anticorps recherchés sont dirigés contre l’ANTIGÈNE POLYOSIDIQUE :  constituant de l’enveloppe spécifique de Treponema pallidum

22 Hématies antigène :  Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Les réactifs

23 Hématies antigène :  Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Les réactifs Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter

24 Hématies antigène :  Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Les réactifs Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Diluant : NaCl à 0,15 mol/L, pH = 7,3

25 Hématies antigène :  Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Sérum (humain) de contrôle positif : prédilué au 1/20 L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Les réactifs Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Diluant : NaCl à 0,15 mol/L, pH = 7,3

26 Hématies antigène :  Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Sérum (humain) de contrôle positif : prédilué au 1/20 Sérum (humain) de contrôle négatif : prédilué au 1/20 L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Les réactifs Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Diluant : NaCl à 0,15 mol/L, pH = 7,3

27 HEMATIES ANTIGENE Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène

28 cardiolipide polyoside d’enveloppe antigène protéique Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum HEMATIES ANTIGENE Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène

29 cardiolipide polyoside d’enveloppe antigène protéique Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide HEMATIES ANTIGENE Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène

30 cardiolipide polyoside d’enveloppe antigène protéique Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide HEMATIES ANTIGENE Sérum à tester Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène

31 cardiolipide polyoside d’enveloppe antigène protéique Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide HEMATIES ANTIGENE Sérum à tester Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène AGGLUTINATION

32 cardiolipide polyoside d’enveloppe antigène protéique Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide HEMATIES ANTIGENE Sérum à tester Adsorption des anticorps à non spécifiques de Treponema pallidum Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène AGGLUTINATION

33 Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin HEMATIES TEMOIN

34 Hématies non sensibilisées Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin HEMATIES TEMOIN

35 Hématies non sensibilisées Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin HEMATIES TEMOIN

36 Hématies non sensibilisées Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Sérum à tester Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin HEMATIES TEMOIN

37 Hématies non sensibilisées Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Sérum à tester PAS D’AGGLUTINATION Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin HEMATIES TEMOIN

38 Lecture des résultats /--

39 Exemple de résultat Cupule

40 Exemple de résultat Cupule Réactif : Interprétation : Résultat : TÉMOIN HÉMATIES AG

41 Exemple de résultat Cupule Réactif : diluant + hématies antigène Interprétation : Résultat : TÉMOIN HÉMATIES AG

42 Exemple de résultat Cupule Réactif : diluant + hématies antigène Interprétation : Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN HÉMATIES AG

43 Exemple de résultat Cupule Réactif : diluant + hématies antigène Interprétation : les hématies antigène sont non autoagglutinables. Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN HÉMATIES AG

44 Exemple de résultat Cupule Réactif : Interprétation : Résultat : TÉMOIN HÉMATIES TEMOIN

45 Exemple de résultat Cupule Réactif : diluant + hématies témoin Interprétation : Résultat : TÉMOIN HÉMATIES TEMOIN

46 Exemple de résultat Cupule Réactif : diluant + hématies témoin Interprétation : Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN HÉMATIES TEMOIN

47 Exemple de résultat Cupule Réactif : diluant + hématies témoin Interprétation : les hématies témoin sont non autoagglutinables. Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN HÉMATIES TEMOIN

48 Exemple de résultat Cupule Réactif : Interprétation : Résultat : TÉMOIN CONTRÔLE SERUM

49 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum à tester + hématies témoin Interprétation : Résultat : TÉMOIN CONTRÔLE SERUM

50 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum à tester + hématies témoin Interprétation : Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN CONTRÔLE SERUM

51 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum à tester + hématies témoin Interprétation : le sérum ne contient pas d’anticorps anti-hématies de poulet Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN CONTRÔLE SERUM

52 Exemple de résultat Cupule Réactif : Interprétation : Résultat : TÉMOIN SERUM POSITIF

53 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum positif + hématies antigène Interprétation : Résultat : TÉMOIN SERUM POSITIF

54 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum positif + hématies antigène Interprétation : Résultat : hémagglutination TÉMOIN SERUM POSITIF

55 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum positif + hématies antigène Interprétation : réaction efficace entre les Ac et Ag Résultat : hémagglutination TÉMOIN SERUM POSITIF

56 Exemple de résultat Cupule Réactif : Interprétation : Résultat : TÉMOIN SERUM NEGATIF

57 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum négatif + hématies antigène Interprétation : Résultat : TÉMOIN SERUM NEGATIF

58 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum négatif + hématies antigène Interprétation : Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN SERUM NEGATIF

59 Exemple de résultat Cupule Réactif : sérum négatif + hématies antigène Interprétation : réaction spécifique : l’Ag n’est pas reconnu pas d’autres Ac du sérum Résultat : pas d’hémagglutination TÉMOIN SERUM NEGATIF

60 Exemple de résultat Cupule Les témoins sont corrects, le test est VALIDE

61 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

62 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE + 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

63 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE + + 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

64 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

65 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

66 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

67 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

68 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 TITRE DU SERUM :

69 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 TITRE DU SERUM :

70 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 TITRE DU SERUM : 640

71 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 CONCLUSION : Titre : 640  80 : réaction positive significative

72 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 CONCLUSION : Titre : 640  80 : réaction positive significative  Existence d’une syphilis actuelle ou passée.

73 Exemple de résultat Cupule DILTUIONS DU SERUM TESTE /80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 CONCLUSION : Titre : 640  80 : réaction positive significative  Existence d’une syphilis actuelle ou passée. Le diagnostic d’une syphilis récente nécessite un 2ème titrage sur du sérum prélevé 2 à 3 semaines après le premier. L’augmentation du taux d’anticorps est en faveur d’une syphilis en évolution.

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