La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine Génotypage Rhésus D fœtal sur sang maternel Bénéfice de la technique chez la femme RhD négatif immunisée.

Présentations similaires


Présentation au sujet: "A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine Génotypage Rhésus D fœtal sur sang maternel Bénéfice de la technique chez la femme RhD négatif immunisée."— Transcription de la présentation:

1 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine Génotypage Rhésus D fœtal sur sang maternel Bénéfice de la technique chez la femme RhD négatif immunisée ou non

2 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL LE COMPLEXE Rh Protéine RHD : protéine transmembranaire du Globule Rouge sites par GR RhD+

3 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL LE LOCUS RH Isolement et séquençage du gène RHD par léquipe française INSERM U76, Y. Colin et al. Genetic Basis of the RhD-Positive and RhD-Negative Blood Group Polymorphism as determined by Southern Analysis. Blood 1991 ; 28 :

4 Gène(s) hybride(s) D-CE-D Gène(s) D muté(s) non fonctionnels Gène D délété Caucasiens RhD Négatif (15 %) < 1% > 99 % Noirs Africains RhD Négatif (3%) % % % LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL PROFIL GENOTYPIQUE RHD Personnes RhD négatif Gène D Haplotype cD e duplication IXIXIVIIIVI Gène Hybride D-CE-D (C)ce s /ce I X I X III IX Gène D délété cde Cde cdE I X Rh box hybride Stop

5 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL ADN fœtal dans le plasma maternel ADN fœtal dans le plasma Quantité de Génomes (copies par ml de plasma maternel) 25 (3 à 70) à 15 S.A. 290 (77 à 769) à terme Isolement Rapide, simple Persistance in vivo Demi-vie < 1 heure Suite à la découverte de la présence dADN fœtal dans le plasma des femmes enceintes (1 à 6 % dADN dorigine fœtale sous forme acellulaire) LO Y.M. et al. Am J Hum Genet, 1998, 62 : Génotype RHD fœtal à partir du sang des femmes enceintes RhD – - Diagnostic non invasif

6 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine Amplification par PCR des séquences spécifiques du gène RHD 3 LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL EN PRATIQUE Sang maternel collecté sur EDTA ( 5 à 7 ml) 72h max entre prélèvement et réception au laboratoire Centrifugation puis décantation plasma 1 Extraction de lADN plasmatique 2

7 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL EN PRATIQUE -Amplification par PCR des séquences spécifiques du gène RHD : - EXON 10 (plus sensible mais moins spécifique) - EXON 7 ( plus spécifique mais moins sensible) - EXON 5 (permet lexclusion dun maximum de variants du gène D silencieux) -Les 3 amplifications distinctes permettant daugmenter la sensibilité du test et détecter un maximum de variant du système RH

8 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL EN PRATIQUE Si DISCORDANCE entre les EXONS : problème de variants RHD (identification possible en fonction de la positivité de chacun des exons ou INDETERMINE) EXON 7 + ORIGINE DE LADN AMPLIFIE Maternelle Fœtale ININTERPRETABLE RHD POSITIF EXON 10 + GENOTYPAGE FOETAL ++ EXON EXON 7 - VERIFICATION EXTRACTION ADN traceur négatif RHD NEGATIF à vérifier Sur un second prélèvement EXON 10 - GENOTYPAGE FOETAL - - ADN Traceur positif RE-EXTRACTION EXON 5 - -

9 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL EN PRATIQUE PREVENTION DES FAUX- NEGATIFS REPETER LE TEST SUR UN SECOND PRELEVEMENT POUR ECARTER LE RISQUE « LOURD » DE FAUX NEGATIF 1) Concentration plus élevée dADN fœtal 2) Rattraper une erreur détiquetage 3) Rattraper un croisement pré-analytique des échantillons FAUX- POSITIFS 1 % dans la population caucasienne Spécificité du test en tant que facteur prédictif du phénotype nest pas parfaite : présence de variants silencieux fœtal du gène RHD hérité du père

10 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL SERIE DE LA LITTERATURE

11 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL Kit de 1ère génération Coopération RECHERCHE –INDUSTRIE (INSERM – INTS- CNRHP - J.BOY) Trousse développée en Kit de 1ère génération pour PCR en Temps Réel avec reporter fluorescent. Marquage CE obtenu en JUIN 2007 Cibles: exons X et VII (amorces CNRHP)Sonde Taqman ADN marqueur : maïs Free DNA Fetal Kit® RhD Kit de génotypage foetal RHD à partir dADN foetal libre du sang maternel (Technique PCR Temps réel) Réf. :

12 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL REGLEMENTATION Depuis le décret 1661 du 22 décembre 2006 le génotypage fœtal RHD peut être effectué uniquement : Dans un laboratoire autorisé par lAgence Régionale dHospitalisation, après avis de lAgence de Biomédecine. Par des praticiens agrées par lAgence de Biomédecine. OBLIGATION DUN CONSENTEMENT DE LA PATIENTE (préalable à une analyse de biologie moléculaire en vue détablir un diagnostic prénatal in utero)

13 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL BENEFICE FOETUS RHD + INCOMPATIBILITE FOETO-MATERNELLE Mise en place dune surveillance anténatale : BIOLOGIQUE (dosage pondéral) OBSTETRICALE (vélocité-doppler à lartère cérébrale moyenne du fœtus) FOETUS RHD – Confirmer sur un second prélèvement Pas de surveillance spécifique PAS DE SITUATION DINCOMPATIBILITE PERMET DE LEGITIMER OU NON UNE SURVEILLANCE ANTENATALE OBSTETRICALE ET BIOLOGIQUE PARTICULIEREMENT CONTRAIGNANTE FEMME RHD – IMMUNISEE ANTI- D INDICATION DU GENOTYPAGE RHD FŒTAL DES 12 SA

14 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL BENEFICE FEMME RHD – NON IMMUNISEE Amniocentèse Ponction de trophoblaste FOETUS RHD + Traitement de la patiente au décours immédiat de lamniocentèse FOETUS RHD- Abstention de traitement sous couvert de confirmer le génotype RHD fœtal sur LA dans les 72h. au minimum 1 semaine avant le geste invasif INDICATION DU GENOTYPAGE RHD FŒTAL

15 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL BENEFICE Réception résultat en moyenne 7 jours après Etude Siham Boujida, sage femme maternité St Antoine Concordance génotypage LA/ sang maternel : 99 % SANS GENOTYPAGE NON INVASIF 102 AVEC GENOTYPAGE NON INVASIF SAT 48 ROT 43 RDB 386 dossiers de femmes RHD- candidates à une amniocentèse Etude sur 3 maternités 342 dossiers étudiés32 exclus car refus PLA ou urgent % traitées 12,5 % traitées 55,5 % RHD+ 39,3 % RHD- 1,71 % Indéterminé 3,42 % Ininterprétable

16 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL BENEFICE FEMME RHD – NON IMMUNISEE A partir de 12 SA Amniocentèse Ponction de trophoblaste Sans Amniocentèse FOETUS RHD + Traitement de la patiente au décours immédiat de lamniocentèse FOETUS RHD- Abstention de traitement sous couvert de confirmer le génotype RHD fœtal sur LA dans les 72h. au minimum 1 semaine avant le geste invasif Cibler limmunoprophylaxie Rh anténatale et les RAI itératives (environ femmes / an en France avec 65% de fœtus RH+) FOETUS RHD + INDICATION DU GENOTYPAGE RHD FŒTAL

17 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL GENIFERH Projet STIC : Génotypage RHD fœtal non invasif systématique Paris-CNRHP / Marseille / Lille / Poissy / Nantes Objectif principal Évaluer le rapport coût-efficacité (4000 patientes) de lapplication systématique du génotypage RhD fœtal non invasif sur lapplication de limmunoprophylaxie RhD et la pratique habituelle de suivi des femmes enceintes RhD négatif des maternités en France (RPC 2005) Objectifs secondaires Faisabilité de la stratégie de génotypage RhD fœtal systématique Analyser les génotypages « indéterminés » et les discordances génotypes- phénotypes Aide à la décision publique de diffusion du génotypage RHD fœtal non invasif au sein du réseau français de soin en obstétrique et du tarif de remboursement du test.

18 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine LE GENOTYPAGE RHD FŒTAL CONCLUSION FEMME IMMUNISEE FEMME ENCEINTE RHESUS D NEGATIF FEMME NON IMMUNISEE AMNIOCENTESE SANS AMNIOCENTESE PERMET DE LEGITIMER OU NON UNE SURVEILLANCE ANTENATALE DEVRAIT PERMETTRE DEVITER INJECTION DIgRHD SI LE GENOTYPE RHD FOETAL EST NEGATIF (40%) PERMET DEVITER INJECTION DIgRHD SI LE GENOTYPE RHD FOETAL EST NEGATIF

19 A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine SCHEMA de lETUDE GENIFERH 1 12 RAI 3e trimestre RAI (4 dernières semaines) Accouchement + 72h LABORATOIRE : SAISIE des données biologiques mère (extemporané) et nouveau-né (phénotype à la naissance) TRANSMISSION des résultats génotypage non invasif à la maternité (tel +fax investigateur) Prélèvement N°1 pour GÉNOTYPAGE Prélèvement N°2 (si N°1 RhD-) pour GÉNOTYPAGE GROUPE MATERNITE GENOTYPAGE GROUPE MATERNITE TEMOIN INCLUSION ÉQUIPE OBSTÉTRICALE - Vérification critères.Femme > 18 ans.Grossesse de 8 à 26 SA.Rh D Négatif non immunisée.pas ATCD génotype invasif.Accoucht prévu Mater réseau - Information -Signature consentement -Remise ordonnance au groupe « génotypage » Recueil N°1 données: Démographie, suivi de grossesse, immunohématologiques, Immunoprophylaxie A ENVOYER: FAX INCLUSION - à URCEST : au LABORATOIRE ACCOUCHEMENT ÉQUIPE OBSTÉTRICALE Recueil N°2 données: * Patiente - Prophylaxie Rh ciblée et systématique - Données immuno-hématologiques - Consultations / hospitalisations * Nouveau-né - Démographie - Données immuno-hématologiques - Phénotype A ENVOYER: FAX ACCOUCHEMENT -à URCEST -au LABORATOIRE. Suivi de grossesse selon les pratiques de la maternité. Immunoprophylaxie RhD en fonction du résultat du génotypage CALENDRIER DE LA GROSSESSE EN SEMAINES DAMÉNORRHÉE.Suivi de grossesse selon les pratiques de la maternité. Immunoprophylaxie RhD selon RPC 2005


Télécharger ppt "A. Mailloux, A.Cortey CNRHP, Hôpital St Antoine Génotypage Rhésus D fœtal sur sang maternel Bénéfice de la technique chez la femme RhD négatif immunisée."

Présentations similaires


Annonces Google