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LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 1. Intérêt Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme.

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1 LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 1. Intérêt Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE. 2. Composition Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium NaNO 3 (1% = 1 g / 100 mL) 3. Principe Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO 3 - sont réduits par la nitrate réductase : - Soit en NITRITES NO 2 - : glucose produits oxydés + n e- NO ……… + ……… NO ……… nitrate réductase (stade nitrites) - Soit en DIAZOTE N 2 : glucose produits oxydés + n e- NO ……… + ……… N 2 + ……… nitrate réductase (stade diazote)

2 LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) -LE RÉACTIF DE GRIESS :  Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) +  -naphtylamine (nitrite 2)  Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO 2 - : Réactif de Griess + ions nitrites NO 2 - COMPLEXE ROUGE -LE ZINC (Zn) :  Composition : Zinc pur (en poudre)  Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO 3 - : Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO 3 - (éventuellement présents) en ions nitrites NO 2 -. Ces ions nitrites NO 2 - peuvent alors réagir avec le réactif de Griess pour former un complexe rouge 4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)

3 5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube) LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) Réactif de Griess (nit1 + nit2) Zinc Observation : coloration rouge Interprétation : présence de NO 2 - issus de la réduction des NO 3 - Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO 2 - ) Observation : coloration rouge Interprétation : le Zn a réduit les NO 3 - encore présents en NO 2 - qui sont révélés par le réactif de Griess. => Pas de réduction de NO 3 - en N 2 Conclusion : NITRATE REDUCTASE - Observation : pas de coloration rouge Interprétation : pas de présence de NO 2 - issus des NO 3 -. Les NO 3 - été réduits en N 2 par la bactérie Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade N 2 ) NIT 1 NIT 2


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