Neisseriaceae et Moraxellaceae

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1 Neisseriaceae et Moraxellaceae
Civel / Joffin - Microbiologie ABM2

2 Famille des Neisseriaceae + Famille des Moraxellaceae :
1. Définition, Morphologie, Classification Famille des Neisseriaceae + Famille des Moraxellaceae : - des coques gram négatif et des coccobacilles gram négatifs, - catalase +, - immobiles, - oxydase +, - Aérobie stricte et de culture souvent difficile.

3 Famille des Neisseriaceae Genre Neisseria (environ 15 espèces)
1. Définition, Morphologie, Classification Famille des Neisseriaceae Genre Neisseria (environ 15 espèces) Diplocoques en grains de café Genre Kingella Genre Eikenella Cocobacilles (diplo svt allongés) Famille des Moraxellaceae Genre Moraxella incluant le genre Branhamella (Branamella catarrhalis, sous le nom de Moraxella catarrhalis) Cocobacilles souvent par 2, souvent pleiomorphes genre Oligella Coccobacille + Acinetobacter

4 1. Définition, Morphologie, Classification
2 classifications possibles

5 2. Habitat / (Pouvoir pathogène)
Neisseria et Moraxella : Parasites strictes de l’homme, font partie de la flore commensale du rhinopharynx et de l’appareil uro-génital. Kingella : commensale des voies respiratoires. Oligella : commensale des voies uro-génitales.

6 - Neisseria gonorrhoeae : gonococcies
2. Habitat / (Pouvoir pathogène) - Neisseria gonorrhoeae : gonococcies - Neisseria meningitidis : méningites - Autres Neisseria (mucosa, flavescens), Oligella et Kingella : rares infections ORL ou urinaires… Chez l’imunodéprimé. Moraxella catarrhalis, lacunata : conjonctivite, infections broncho-pulmonaires…

7 3. Isolement Moraxella - Germes fragiles.
- Isolement rapide / conservation (milieu de Stuart) - Gélose au sang cuit ou la gélose Chocolat enrichie (GC + Polyvitex) - Gélose sélective : le milieu de THAYER et MARTIN : Chocolat enrichie additionnée de VCN (Vancomycine, Colimycine, Nystatine), VCF, VCAT (Vancomycine, Colimycine, Amphotéricine (=Fungizone), Triméthoprime). Moraxella

8 3. Isolement - Germes fragiles.
- Isolement rapide / conservation (milieu de Stuart) - Gélose au sang cuit ou la gélose Chocolat enrichie (GC + Polyvitex) - Gélose sélective : le milieu de THAYER et MARTIN : Chocolat enrichie additionnée de VCN (Vancomycine, Colimycine, Nystatine), VCF, VCAT (Vancomycine, Colimycine, Amphotéricine (=Fungizone), Triméthoprime). Remarque : 5% des gonocoques sont sensibles à la vancomycine (donc, toujours ensemencé un milieu sélectif en plus du non- sélectif) - L’isolement à 36°C +/- 0,5°C (37°C), 95 % d'humidité et 10 % de CO2 CO2 : bougie, jarre avec Gaspack* CO2, étuve-incubateur à CO2 *H+ + HCO3- donne CO2 + H2O

9 Après l'examen microscopique :
4. Identification Après l'examen microscopique : - Le type respiratoire : VF + sérum (ou ascite) - la Voie d'Attaque des Glucides : CTA (Glc, Mal, Fru, Sac) - l'Oxydase - la nitrate réductase + nitrite réductase. - La formation de polyosides (en milieu hypersaccharosé) - la recherche de la tributyrine-hydrolase (Tributyrine + eau donne glycérol + 3 acide butanoïques : halot d’éclaircissement + jaune) - la DNAse (bleu de toluidine) - la gamma glutamyl transférase. (gama-glutamyl-nitroanilide + glycylglycine donne un produit coloré) - l’ONPG hydrolase - la galerie Pasteur Neisseria et la galerie API NH. (API NH contient : zymogramme glucidique, NR, Tributyrine-Hydrolase…)

10 La recherche de bétalactamase directe (constitutive)
4. Identification et Antibiogramme Antibiogramme : milieu riche et pas d'antagonisme avec les composants (sulfamides et thymidine par ex.). : gélose chocolat enrichie… La recherche de bétalactamase directe (constitutive) En cas de doute, la CMI pourra être précisée par le E-test (bandelette). Ré-évaluer le traitement initial à la lumière de l'antibiogramme

11 4. Identification et Antibiogramme
2 genres dominent la pathologie, Neisseria gonorrheae et Neisseria meningitidis. (BPS) + des opportunistes comme Moraxella catarrhalis. La morphologie peut être précisée à partir de l'antibiogramme : autour des disques de bétalactamines (sauf Imipénème), les formes coques deviennent des bacilles (sauf pour les "vrais coques").

12 5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque)

13 5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque)
(Découverte, dans un pus urétrel, 1879 Neisser, culture par Loeffler en 1892) Responsable d'une infection sexuellement transmissible (IST), la gonococcie, chaude pisse ou blennorragie.

14 - Actuellement en diminution. Le seul réservoir est l’homme.
5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque) 5.1. La maladie : - Actuellement en diminution. Le seul réservoir est l’homme. - Chez l'homme : urétrite douloureuse (chaude pisse), rare complication - Chez la femme : urétrite ou cervicite. Pertes vaginales purulentes (+ dysurie) mais souvent inapparente (80%). → facteur de dissémination. → risques d’infertilité - Chez le nouveau-né : ophtalmite grave + possible cécité. (Contamination au moment de l’accouchement) Prophylaxie : l’instillation de collyre au nitrate d’argent ou d’érythromycine obligatoire à la naissance en France.

15 5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque)

16 Adhésion aux cellules épithéliales, grâce aux pilis.
5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque) 5.2. Le pouvoir pathogène : Multiplication intracellulaire, dans les cellules épithéliales, grâce à des propriétés antiphagocytaires. Adhésion aux cellules épithéliales, grâce aux pilis. La réaction inflammatoire amène des granulocytes neutrophiles qui sont envahis par les gonocoques, dont une protéine faciliterait ou provoquerait la phagocytose.

17 5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque)
5.3. Le diagnostic : - Prélèvement : urétral, vaginal, endocervical, oropharynx, anorectal (le matin, avant la miction). - L’examen direct : coques gram négatifs libres ou localisés à l'intérieur des granulocytes neutrophiles parasités.

18 5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque)

19 - L’identification : API NH.
5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque) 5.3. Le diagnostic : - L'isolement : GC enrichie et GC enrichie + VCN, IMPÉRATIVEMENT sous CO2. - L’identification : API NH. Il est très important d’identifier le germe (pour la différenciation d'avec le méningocoque, hôte vaginal possible) Il existe un test par co-agglutination commercialisé par Murex (?). La détermination d'auxotype peut avoir un intérêt épidémiologique…

20 5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque)
5.4. Traitement : Antibiotiques : ampicilline-pénicilline G et probénécide / spectinomycine (aminoside utilisé uniquement contre le gonocoque) / thiamphénicol / tétracyclines Le traitement minute 1997 : ceftriaxone. Le traitement minute est particulièrement utile pour des patients qui risquent de ne pas revenir ! Malheureusement, l'apparition de souches bétalactamase positive est importante.

21 On estime, sur 86 souches isolées à l'Institut Fournier en 1996, que :
5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque) On estime, sur 86 souches isolées à l'Institut Fournier en 1996, que : - 31 % très sensibles à Pénicilline G (CMI < 0,0625 µg/mL) - 36 % sensibilité diminuée (CMI 0, ) - 32,6 % résistantes (CMI > 1)

22 Traitement du malade et de ses partenaires. Il n'existe pas de vaccin.
5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque) 5.5. Prophylaxie : Traitement du malade et de ses partenaires. Il n'existe pas de vaccin. La prophylaxie est celle des MST + Chez le nouveau-né, l'instillation de gouttes de nitrate d'argent dans les yeux prévient l'infection. Statistiques : environ 1,5 gonocoque par an et par laboratoire...

23 Antibiotiques période 2001-2002 :
5. Physiopathologie : Neisseria gonorrheae (gonocoque) Antibiotiques période : - 73% des souches sont Intermédiaire pour la pénicilline, 10 % résistantes et donc 24 % sensibles. - 16 % sont résistantes à la Ciprofloxacine avec une forte augmentation (6 % en ). - 100 % sont sensibles au Ceftriaxone et à la Spectinomycine.

24 6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque)

25 Découverte en 1887 par Weichselbaum.
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) Découverte en 1887 par Weichselbaum. Elle est responsable de redoutables méningites et de purpura fulminans. Bactérie qui touche surtout l’enfant et le jeune adulte (non encore immunisés).

26 Découverte en 1887 par Weichselbaum.
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) Découverte en 1887 par Weichselbaum. Elle est responsable de redoutables méningites et de purpura fulminans. Bactérie qui touche surtout l’enfant et le jeune adulte (non encore immunisés). En France, - La prévalence du portage varie de 5 à 50 % de la population selon le degré de promiscuité. - La maladie touche les jeunes et les personnes âgées. - L'incidence de la maladie est de 1/ habitants par an. - Les épidémies sont fréquentes dans les pays en voie de développement. + pèlerinage de la Mecque..;

27 6.1. La bactérie et son habitat :
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.1. La bactérie et son habitat : - Hôte habituel du rhino-pharynx + autres muqueuses (vaginales)... - Elle est strictement humaine ! - N. meningitidis est capsulée. (= sérovars : les plus importants sont A, B, C (90 %) + X, Y, Z, 29E, W135, H, I, K, L) Le groupe A est africain, le groupe B européen et USA, le C américain. Le sérogroupage est réalisé par agglutination directe avec les anticorps ou par co-agglutination latex,

28 6.1. La bactérie et son habitat :
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.1. La bactérie et son habitat : - Hôte habituel du rhino-pharynx + autres muqueuses (vaginales)... - Elle est strictement humaine ! - N. meningitidis est capsulée. (= sérovars : les plus importants sont A, B, C (90 %) + X, Y, Z, 29E, W135, H, I, K, L) Le groupe A est africain, le groupe B européen et USA, le C américain. Le sérogroupage est réalisé par agglutination directe avec les anticorps ou par co-agglutination latex, La pathogénicité des différentes souches est variable, dépendant de plus de l'hôte... Et des facteurs de virulence

29 Adhésion : pili ! 6.2. La maladie :
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.2. La maladie : - Colonisation rhinopharyngée, souvent inapparente, - Passage du rhinopharynx vers le sang (méningococcémie) , dans certains cas… On parle d’infections invasives à méningocoques. 1) une méningite cérébrospinale (Fièvre, frissons, asthénie), puis : céphalées intenses, vomissement, raideur de la nuque (syndrome de Kerning), photophobie… Adhésion : pili !

30 - Colonisation rhinopharyngée, souvent inapparente,
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.2. La maladie : - Colonisation rhinopharyngée, souvent inapparente, - Passage du rhinopharynx vers le sang (méningococcémie) , dans certains cas… On parle d’infections invasives à méningocoques. 1) une méningite cérébrospinale (Fièvre, frissons, asthénie), puis : céphalées intenses, vomissement, raideur de la nuque (syndrome de Kerning), photophobie… 2) une forme fulminante : le purpura fulminans (Fièvre, cyanose, purpura, arthralgies). Ce purpura est lié à une CIVD, déclenchée par l'action anormale du LPS sur les leucocytes (libérant TNFalpha et InterLeukine 1) Choc toxique : liée à une grande sensibilité d'individus particuliers(25 % des infections)

31 - Colonisation rhinopharyngée, souvent inapparente,
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.2. La maladie : - Colonisation rhinopharyngée, souvent inapparente, - Passage du rhinopharynx vers le sang (méningococcémie) , dans certains cas… On parle d’infections invasives à méningocoques. 1) une méningite cérébrospinale (Fièvre, frissons, asthénie), puis : céphalées intenses, vomissement, raideur de la nuque (syndrome de Kerning), photophobie… 2) une forme fulminante : le purpura fulminans (Fièvre, cyanose, purpura, arthralgies). Ce purpura est lié à une CIVD, déclenchée par l'action anormale du LPS sur les leucocytes (libérant TNFalpha et InterLeukine 1) Choc toxique : liée à une grande sensibilité d'individus particuliers(25 % des infections) 3) des arthrites 4) une pneumonie

32 6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque)
6.2. La maladie : La transmission est strictement interhumaine par les gouttelettes de salive contaminée. La maladie est favorisée par la promiscuité, le manque d’hygiène…

33 En cas de méningite, l'examen du LCR permet le diagnostic par :
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.3. Diagnostic : En cas de méningite, l'examen du LCR permet le diagnostic par : - l'examen direct (coques Gram -) - l'isolement - la détection d'antigènes solubles - l’amplification génique La bactérie est aussi découverte alors dans le sang par hémoculture. Dans les autres prélèvements, la présence de N. meningitidis a une moindre valeur.

34 6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque)
6.4. Traitement : Antibiothérapie : ampicilline-pénicilline G chloramphénicol ou thiamphénicol. Problème : apparition de souches bétalactamase positive est importante mais moindre que pour le gonocoque.

35 Impossible actuellement contre le polyoside B.
6. Physiopathologie : Neisseria meningitidis (méningocoque) 6.5 Prophylaxie : - Vaccination contre les polyosides A, C, Y, W135 (deux vaccins disponibles : bivalent A-C et tétravalent A-C-Y-W135). L’immunité provoquée n’est que de 2 à 3 ans. Elle est obligatoire pour le pèlerinage à La Mecque depuis l'épidémie de 1987. Impossible actuellement contre le polyoside B. - Chimio-prophylaxie des sujets contact est entreprise si possible. Les antibiotiques utilisés sont la Rifampicine ou la spiramycine en cas de contre-indication, en particulier la grossesse.

36 Hôte fréquent du rhinopharynx.
7. Physiopathologie : Moraxella (Branhamella) catarrhalis Hôte fréquent du rhinopharynx. Elle est responsable, sur des sujets à risque, d'infections de l'arbre respiratoire (otites moyennes, sinusites) comme le pneumocoque ou Haemophilus influenzae. Les infections sont souvent nosocomiales. Sa bétalactamase est particulièrement répandue.

37 7. Physiopathologie : Moraxella (Branhamella) catarrhalis
Présence d'une désoxyribonucléase (DNase) : Sur gélose à l'ADN ensemencer la bactérie à étudier, 37°C, Après 24h, révêler avec le réactif de Frazier (acide chlorydrique). + chez M. catarrhalis. Très bon caractère différentiel avec les Neisseria qui en sont dépourvues.