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Pseudomonas aeruginosa La bactérie, sa sensibilité aux antibiotiques, son antibiogramme.

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1 Pseudomonas aeruginosa La bactérie, sa sensibilité aux antibiotiques, son antibiogramme.

2 INTRODUCTION

3 Bactérie de lenvironnement Pathogène opportuniste Infections graves Résistance aux antibiotiques

4 La bactérie

5 1882 Charles GESSARD En latin : puons =pus cyaneus = bleu foncé Espèce – type du genre PSEUDOMONAS Bactérie ubiquitaire Saprophyte environnement humide : eau et sol P athogène opportuniste chez les malades immunodéficients Facteurs de pathogénicité+++ Résistance +++ (ATB et ATS) Infections nosocomiales (8 à 10% selon ACAR) et communautaires

6 Habitat Réservoirs EAUX : Rivière, eaux usées, boues activées, eau de piscine, eaux minérales, eaux thermales, eaux de boisson. VEGETAUX : Légumes, Salades, fruits, fleurs et aliments ENVIRONNEMENT HOSPITALIER : Matériel chirurgical ( humidificateur, barbotteur, KT, endoscopes…), Solutions antiseptiques (Eosine aqueuse) Solutions de nettoyage des lentilles de contact Médicaments et produits cosmétiques Lieux humides, lavabos, baignoires, cuvettes, éponges, porte-savon… HOMME : Expectorations, urines, pus ORL, pus articulaires, PV, liquide pleural, selles, zones humides (périné, creux axillaire ) : Colonisation

7 Pouvoir pathogène : Infections : Infections oculaires: kératites, abcès de cornée, endophtalmies Infections cutanées bénignes ou graves : Ectyma Gangrenosum, infections de plaies chirurgicales, infections chez les brûlés Infections respiratoires (mucoviscidose) Otites – externes aiguës ou malignes – moyennes chroniques Colonisation Origine endogène ++ – muqueuses pharyngées et intestinales colonisées adhésion et multiplication Transmission – croisée manuportée – solution aqueuse ou équipement contaminé

8 Mortalité des IN : Très élevée – jusquà % au cours des pneumopathies – jusquà % au cours des septicémies

9 P. aeruginosa : CARACTERES BACTERIOLOGIQUES MORPHOLOGIE : petit bacille fin 1.5-3µ x µ Gram – très mobile (vol de moucheron) en AEROBIOSE asporulé, SLIME : Couche mucoïde donnant un aspect muqueux à la culture et une plus grande virulence ( soppose à la phagocytose)

10 Caractères morphologiques

11 Caractères culturaux

12 Colonies la Colonies M Colonies sm

13 Culture facile sur milieu nutritif simple Bactérie aérobie stricte Culture entre 8°C et 41°C Production de pyocyanine et de Pyoverdine Dégage une odeur arome de Jasmin par production dorthoamino-acétophénone

14 Caractères biochimiques Oxydase +, Catalase +, réduction des nitrates jusquau stade N2 Métabolisme respiratoire (MEVAG :Oxydatif) TSI : Lactose -, Saccharose -, H2S –, Gaz- (pente gris métallisée) Citrate +, ADH +, Acetamide +

15 Sa sensibilité aux antibiotiques

16 Résistances Naturelles : Pénicillines G, A et M C1G, C2G et certaines C3G Cotrimoxazole Macrolides, Cyclines C hloramphénicol Quinolones de première génération Kanamycine Rifampicine, glycopeptides, ac. fusidique

17 Molécules actives : Carboxypenicillines : ticarcilline Ureidopenicillines : Piperacilline Ticarcilline+Acide clavulanique piperacilline +Tazobactam Monobactames : Aztreonam Carbapénèmes : Imipénème, Méropénème ceftazidime, cefsulodine, céfépime, cefpirome Aminosides : gentamicine, tobramycine, amikacine, nétilmicine,isépamicine Fluoroquinolones : Ciprofloxacine colimycine fosfomycine

18 Résistance naturelle 1. imperméabilité 2. Systèmes defflux actifs 3. Hydrolyse enzymatique ( ex:céphalosporinase chromosomique bas niveau) Mécanismes de résistance de P. aeruginosa Résistance acquise 1. Modification de la perméabilité 2. Hyper expression efflux actif 3. modification de la cible 4. Hydrolyse enzymatique

19 ATB ++++ Inactivation enzymatique (naturelle ou acquise) Efflux actifs (naturels) hyper expression (acquise) Imperméabilité (naturelle ou acquise) Modification de la cible (acquise) Cellule bactérienne

20 Mécanismes de R. acquise aux β-Lactamines ENZYMATIQUES: -Penicillinases transférables (PSE, OXA,TEM) -Cephalosporinases déreprimées -BLSE (PER-1, OXA, TEM, SHV) -Imipénèmase (IMP-1) NON ENZYMATIQUES : - perte de la porine D2 (modification de la perméabilité) - Hyper expression defflux actif - modification structurale du LPS (modification de perméabilité) - modification daffinité des PLP (modification de cible)

21 Résistance aux Aminosides RESISTANCE NATURELLE ACQUISE Kanamycine - Non enzymatique - Enzymatique

22 Résistance non enzymatique : Inhibition du transport actif (perméabilité) ++ Efflux (Mex XY-OprM) +++ Mutation ribosomale (cible) + Résistance enzymatique +++ (AAT, ANT, autres enzymes ) Associations fréquentes Mécanismes de résistance acquise

23 Diminution daffinité de la cible – DNA gyrase- topoisomérase II, sous-unités A (gyrA) – topo-isomérase IV (parC) Imperméabilité – porines (oprF), LPS Hyper expression de divers systèmes defflux Associations fréquentes Résistance aux Fluoroquinolones

24 Son antibiogramme

25 Technique : Méthode de diffusion en gélose Fiche technique n°1 : Bactéries non exigeantes (fascicule: Standardisation de lantibiogramme en Médecine humaine à léchelle nationale selon les recommandations de lOMS 4 ème édition 2005) Inoculum : 0,5 MF Ensemencement de 2 boîtes rondes (90mm ø) de milieu Mueller-Hinton CIP GM AN FOS TOB CAZ IMP PIPTIC ATM TCC 24mm

26 Liste des antibiotiques à tester Ticarcilline (TIC) Ticarcilline + Acide Clavulanique (TCC) Pipéracilline (PIP) Ceftazidime (CAZ) Aztreonam (AZM) Imipeneme (IMP) Gentamicine (GM) Tobramycine (TOB) Amikacine (AN) Ciprofloxacine (CIP) Fosfomycine (FOS)

27 Contrôle de qualité : souche Pseudomonas aeruginosa ATCC Lecture : Mesurer avec précision à laide dun pied à coulisse, les diamètres des zones dinhibition, à lextérieur de la boîte fermée. Comparer ces diamètres aux valeurs critiques de la table de lecture n°10 page 100 du fascicule de Standardisation. Classer la bactérie dans lune des catégories S, I, R Lecture interprétative : nécessite de connaître les mécanismes de résistances de Pseudomonas aeruginosa.

28 Lecture et interprétation

29 Molécules à tester

30 Bêtalactamines

31 Phénotype Sauvage TIC S PIP S TCC S CAZ S ATM S IPM S

32 Phénotype sauvage Présence dune céphalosporinase chromosomique inductible Amp C (Antagonisme entre TIC : substrat et linducteur IPM) antagonisme

33 Phénotype sauvage : Céphalosporinase chromosomique inductible : Substrats : TIC, CAZ Inducteur : IMP

34 Expression dune pénicillinase Haut niveau Résistance à la TIC et à la PIP Restauration par lAcide Clavulanique de lactivité de la TIC Pseudomonas aeruginosa PSE-1

35 Pseudomonas aeruginosa PSE-3 Expression dune Pénicillinase bas niveau: Résistance à la TIC et sensibilité à la PIP Restauration de lactivité de la TIC par lacide clavulanique

36 Pseudomonas aeruginosa OXA-4 Expression dune autre Pénicillinase bas niveau: Résistance à la TIC et à la PIP Restauration faible de lactivité de la TIC par lacide clavulanique

37 Phénotype : Céphalosporinase déréprimée

38 Phénotype Céphalosporinase déréprimée : Hyperproduction de la Céphalosporinase chromosomique (mutation)

39 Phénotype BLSE

40

41 BLSE : Image de Synergie entre TCC (Ticarcilline+Acide Clavulanique) et Aztreonam (ou Ceftazidime)

42 Phénotype BLSE

43 Altération Porine D2

44

45 Phénotype : Carbapénèmase VIM-2

46 Phénotype hyper expression defflux actif

47 Autres molécules

48 Phénotype Sauvage GM S TOB S AMK S

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51 Antibiotiques2005 (n=2228) Ticarcilline17% Pipéracilline17,2% Ceftazidime13,2% Imipenem10,7% Gentamicine20,3% Tobramycine17% Amikacine9,2% Pefloxacine31,7% Ofloxacine21,6% Ciprofloxacine15% Données de résistance (R+I) aux antibiotiques de P.aeruginosa pour lannée Réseau AARN

52 CONCLUSION Bactérie saprophyte donc naturellement multi résistante Nombreux mécanismes de résistance acquise avec fréquente intrication de plusieurs mécanismes Difficultés thérapeutiques car Multi résistance+terrain


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