Milieu Clark et Lubs.

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1 Milieu Clark et Lubs

2 Type de milieu C’est un milieu liquide qui permet l’identification des entérobactéries par l’étude du métabolisme glucidique. On réalise deux tests : Test Vosges-Proskauer (test VP) Test du Rouge de Méthyle (test RM)

3 Test de Vosges-Ptroskauer (VP)
Il permet de détecter la production d’acétoïne, de dyacétyl et de butane-diol à partir de la fermentation du glucose. Le réactif ajouté (l’alpha naphtol) permet dans le cas d’un milieu basique et en présence de dioxygène, d’obtenir une coloration rosé ou rouge acétoïne dyacétyl + KOH + alpha naphtol + 0² coloration rosé ou rouge butane-diol

4 Test du Rouge de Méthyle (RM)
Il permet de détecter la production d’acides plus ou moins forts et plus ou moins volatiles au cours de la fermentation. Sont ajoutées au milieu quelques gouttes d’un indicateur coloré de pH : le rouge de méthyle (rouge en milieu acide et jaune en milieu basique). si les bactéries produisent des acides forts au cours de la fermentation. Le milieu reste acide et donc en rouge. si les bactéries produisent des acides faibles le milieu s’est acidifié, puis ré-alcalinisé. Le milieu est donc jaune.

5 Composition Clark et Lubs : peptone 5,0 g k2PO4 5,0 g glucose 5,0 g
pH 7,5 Réactif : VP : alpha naphtol 60 g éthanol à 60% 1 L RM : Rouge de méthyle 5,0 g KOH ou NaOH : 4 mol/L en solution aqueuse

6 Ensemencement et lecture
3 gouttes de KOH ou NaOH + 5 gouttes de VP Et lecture au bout de 10 minutes 2-3 gouttes de RM Agitation et lecture immédiate

7 Interprétation Milieu rouge =>présence d’acide fort
=>acidification =>test du RM positif Milieu rouge =>présence d’acétoïne et/ou de dyacétyl et/ou de butane-diol =>test du VP positif Milieu jaune =>absence d’acide fort =>pas d’acidification =>test du RM négatif Milieu jaune =>absence d’acétoïne et de dyacétyl et de butane-diol =>test du VP négatif