Les examens biologiques en Hématologie

Présentation au sujet: "Les examens biologiques en Hématologie"— Transcription de la présentation:

1 Les examens biologiques en Hématologie
Rémi Letestu Laboratoire d’Hématologie CHU Avicenne UFR SMBH DCEM1 ( )

2 Progéniteurs lymphoïdes
Hématopoïèse Cellules souches Progéniteurs lymphoïdes CFU-GEMM MOELLE OSSEUSE BFU-E CFU-E Tpo réticulocytes mégacaryocytes SANG plaquettes monocytes éosinophiles T érythrocytes B neutrophiles basophiles lymphocytes macrophages

3 Les différents examens
SANG NFS ou hémogramme Frottis sanguin MOELLE OSSEUSE Myélogramme Biopsie médullaire GANGLION (adénopathie) Ponction gg Biopsie gg BIOPSIES Chirurgicales ou à l’aiguille

4 Les différentes techniques
CYTOMETRIE EN FLUX ou IMMUNOPHENOTYPAGE CYTOLOGIE Cytochimie CYTOGENETIQUE HISTOLOGIE ou ANATOMO-PATHOLOGIE BIOLOGIE MOLECULAIRE

5 Hémogramme ou NFS Définition: analyse quantitative et qualitative des éléments figurés du sang Décompte des GR, GB, et plaquettes par unité de vol de sang (numération) Décompte des ≠ sous-types de GB (formule sanguine) Analyse morphologique de ces éléments

6 La Numération Formule Sanguine (NFS)
Ponction de sang veineux Prélèvement sur anticoagulant : EDTA Compteurs Automatiques : importance des contrôles ++

7 Valeurs Normales de l ’Hémogramme
La Numération Globules Blancs : x109/L x109/L Plaquettes : x109/L 20 x109/L Globules Rouges H : x1012/L F : x1012/L E : x1012/L NRS : 5-6 x1012/L Hémoglobine (Hb) H : g/dL F : g/dL E : g/dL NRS : g/dL Hématocrite H : 40-54% F : 35-47% E : 36-44% NRS : 44-62%

8 Valeurs Normales de l ’Hémogramme
Les Réticulocytes Automates / Coloration sur lame (/1000 GR) Environ 1-/120° des GR Expression en valeur absolue 25000 à quand Hb Normale La Formule Polynucléaires Neutrophiles : 1.7-7x109/L Polynucléaires Eosinophiles : 0-0.5x109/L Polynucléaires Basophiles : x109/L Lymphocytes : 1.5-4x109/L Monocytes : 0.1-1x109/L

9 Valeurs Normales de l ’Hémogramme
Les constantes de Wintrobe Volume Globulaire Moyen (VGM) fl (83-97) Concentration Corpusculaire Moyenne en Hb (CCMH) 32-36% Teneur Corpusculaire Moyenne en Hb (TCMH) pg/cellule

10 Frottis sanguin Technique Étalement d’une goutte de sang sur une lame
Coloration May-Grünwald-Giemsa (MGG) Analyse au microscope Indications Diagnostic d’anomalies morphologiques Des GR Des GB Des plaquettes Recherche et identification de cellules anormales myélémie, blastes cellules lymphomateuses Vérification du nombre de plaquettes++

11 Quand prescrire un Hémogramme en urgence
Etat de choc Pâleur intense, asthénie, Angine ulcéro-nécrotique ou résistante aux antibiotiques Fièvre élevée après prise de médicament, surtout après chimiothérapie anti-mitotique Fièvre résistante aux antibiotiques Purpura pétéchial, syndrome hémorragique

12 Valeurs de l’hémogramme indiquant une consultation spécialisée en urgence
Hématocrite supérieur à 60 % Anémie inférieure à 7 g/dl ou mal tolérée Neutropénie inférieure à 200/mm3 (0.2 G/L) Hyperleucocytose faite de cellules immatures supérieure à /mm3 Thrombopénie inférieure à /mm3 (20 G/L) même sans syndrome hémorragique Après élimination d’une fausse thrombopénie à l’EDTA

13 Le Myélogramme Anémies normo ou macrocytaires arégénératives
Historique Arinkin Mallarmé Ponction Sternale / Iliaque Post > Antérieure Indications Nombreuses : toute suspicion d’anomalie centrale de production des éléments du sang Anémies normo ou macrocytaires arégénératives et/ou Neutropénies et/ou Thrombopénie Pancytopénie Pic monoclonal Diagnostic Analyses spécialisées Contre-indications Très rares - Enfant - Contre indication sternale Troubles graves de la coagulation

14 Le Myélogramme Trocart de type Mallarmé Trocarts de type Jamshidi
Précautions Indispensables Chez l ’enfant Formation au geste Règles strictes Déroulement du geste Anesthésie locale Ponction Réalisation des frottis : point essentiel Trocart de type Mallarmé Trocarts de type Jamshidi

15 Le Myélogramme Quantité & Qualité de la Moelle Osseuse
Cellules à l ’origine des éléments circulants Exploration des lignées Myéloïde et Lymphoïde

16 La lignée granuleuse neutrophile
MB Myéloblaste PML Promyélocyte MLN Myélocyte neutrophile MMLN Métamyélocyte PN Polynucléaire neutrophile

17 La lignée érythroblastique
PROER Proérythroblaste La lignée érythroblastique ERB Érythroblaste basophile ERP Érythroblaste polychromatophile ERA Érythroblaste acidophile

18 Facile, non douloureux, informatif ++
L ’Adénogramme Organe lymphoïde Exploration des lignées Lymphoïdes Ponction aiguille Frottis Facile, non douloureux, informatif ++

19 Les Biopsies Chirurgicales A l’aiguille Masse tumorale (lymphomes)
Ganglion : La biopsie ganglionnaire A l’aiguille Sous Scanner La Biopsie Ostéo-Médullaire (BOM)

20 La biopsie ganglionnaire
Prélèvement ganglion entier par technique chirurgicale Morphologie, coupes histologique Immunomarquages sur lame immunocytochimie Suspension de cellules

21 La biopsie ostéomédullaire (BOM)
Historique Arinkin 1950 développement Ponction Iliaque Post Indications Nombreuses Diagnostic et Bilan d ’extension Analyses spécialisées Contre-indications Rares Troubles graves de la coagulation Thrombopénie sévère, thrombopathie Déroulement du geste

22 La Cytométrie en Flux Système Fluidique Paramètres Optiques
Mélange cellulaire hétérogène et complexe Injection de la suspension cellulaire Liquide de gaine sous pression Etirement de la veine liquide Alignement et passage des cellules une par une dans la chambre d ’analyse Paramètres Optiques Dans la chambre d’analyse : impact avec un faisceau LASER Lumière monochromatique cohérente «Eclairage de la cellules» Taille relative : Forward Scatter ou FSC Complexité cytoplasmique : Side Scatter SSC Excitation des fluorochromes et émission de fluorescence

23 Paramètres fluorescents
Pourquoi la cellule est-elle fluorescente ? Les cellules expriment des marqueurs antigéniques : Protéines Sucres En surface ou en intracytoplasmique Marqueurs classés en CD (Cluster de Differenciation) Sélection d’anticorps reconnaissant spécifiquement ces marqueurs Couplage des anticorps à différents fluorochromes Signaux fluorescents recueillis : Nombre et type de marqueurs exprimés Qualitatif Densité d’expression Quantitatif

24 Conversion en données numériques
Recueil des signaux optiques : Miroirs, filtres, photomultiplicateur Transformation en signaux électroniques pour une analyse informatique avec un logiciel dédié Mise en forme des données Analyse des graphes, positionnement des seuils de positivité et des populations d’intérêt, statistiques

25 Applications dans un Laboratoire de Recherche
Etudes de la fonction Immune Cellules Hématopoïétiques Etudes Multi-drug résistance (cancer) Etudes cinétiques (fonction cellulaire) Analyse des plaquettes Détection des Microorganismes (Bactéries, Parasites) Analyse des échantillons de l’environnement (Giardia, Cryptospiridium) Détection Micro-Particules & Virus

26 Applications en Biologie Médicale
Immunophénotypage Leucémie et Lymphomes Suivi de la maladie résiduelle des hémopathies Immunophénotypage VIH Comptes Absolus CD4 Numération cellules progéniteurs (CD34) Analyse des glycoprotéines plaquettaires Cycle cellulaire et ploïdie de tumeurs Numération des Réticulocytes Cross-Match (transplantation d’organe) Détection des Leucocytes Résiduels

27 Caryotype Culture Mitoses Classement des chromosomes
Cytogénétique Caryotype Culture Mitoses Classement des chromosomes FISH Hybridation in situ de sondes fluorescentes

28 n Cycles = 2n copies Biologie Moléculaire
PCR : Polymerase Chain Reaction Sur ADN Sur ADN complémentaire RT-PCR Séquençage X2 X2 n Cycles = 2n copies X2

29 RT-PCR quantitative (RQ-PCR) pour le suivi des patients
Biologie Moléculaire 14q32 Recherche d’équivalent moléculaire de translocation IgH-Bcl1 et t(11;14) IgH-Bcl2 et t(14;18) Recherche d’expression dérégulée d’un gène Cycline D1 (t(11;14)) Recherche de transcrit de fusion BCR-Abelson et t(9;22) VH DH JH m d g a e PRAD1/BCL1/CCND1 120kb 11q13 D1 D2 D3 RT-PCR quantitative (RQ-PCR) pour le suivi des patients

30 Culture des progéniteurs hématopoïétiques
EEC CFU-E EEC = endogenous erythroid colonies Formation des colonies érythroïdes « spontanées » in vitro

31 Hyperlymphocytose ou Lymphocytes atypiques
Conclusion : Orientation Diagnostique Monotypie douteuse Lymphome T CD19+5- CD19+5+ Score 4-5 Score 1-2-3 Score bas Compléments CMF LLC typique : diagnostic positif Immuno- phénotypique LNH du Manteau SLPC CD5+ (LLC atypique ou autre) LNH Folliculaire LNH Zone marginale L. à Tricholeucocytes SLVL LNH lymphoplasmocytaire L. Prolymphocytaire B (Galton) Cytométrie en Flux Syndrome mononucléosique Hyperlymphocytose ou Lymphocytes atypiques Cytogénétique FISH Anatomie pathologique Biologie Moléculaire Examens spécialisés complémentaires